Ola Saposhnikovia divaricata fìor-ghlan airson coinnlean is siabann a dhèanamh, ola riatanach diffuser mòr-reic ùr airson diffusers losgaidh cuilc
tuairisgeul goirid:
2.1. Ullachadh SDE
Chaidh riosoman SD a cheannach mar luibh thioram bho Hanherb Co. (Guri, Coirea). Chaidh na stuthan planntrais a dhearbhadh gu tacsonamach leis an Dr. Go-Ya Choi bho Institiud Leigheas an Ear Choirea (KIOM). Chaidh sampall dearbhaidh (àireamh 2014 SDE-6) a thasgadh ann an Lus-lann Coirea de Ghoireasan Luibheach Coitcheann. Chaidh riosoman tiormaichte SD (320 g) a thoirt a-mach dà uair le 70% ethanol (le ath-shruthadh 2 uair a thìde) agus an uairsin chaidh an earrann a dhùmhlachadh fo chuideam lùghdaichte. Chaidh an decoction a shìoladh, a liofileachadh, agus a stòradh aig 4°C. B’ e 48.13% (w/w) toradh an earrainn thioram bho stuthan tòiseachaidh amh.
Rinneadh mion-sgrùdadh cròmatagrafach le siostam HPLC (Waters Co., Milford, MA, USA) agus lorgaire sreath fotodiode. Airson mion-sgrùdadh HPLC air SDE, chaidh am prìomh-OChaidh inbhe -glucosylcimifugin a cheannach bho Institiud Brosnachaidh Korea airson Gnìomhachas Leigheas Traidiseanta (Gyeongsan, Korea), agusdiog-O-glucosylhamaudol agus 4′-O-β-D-glucosyl-5-OChaidh -methylvisaminol a sgaradh bhon obair-lann againn agus chaidh an comharrachadh le mion-sgrùdaidhean speactram, gu sònraichte le NMR agus MS.
Chaidh sampallan SDE (0.1 mg) a sgaoileadh ann an 70% ethanol (10 mL). Rinneadh dealachadh cròmatagrafach le colbh XSelect HSS T3 C18 (4.6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Bha an ìre gluasadach air a dhèanamh suas de acetonitrile (A) agus 0.1% searbhag aiseatach ann an uisge (B) aig ìre sruthadh de 1.0 mL/min. Chaidh prògram caisead ioma-cheum a chleachdadh mar a leanas: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min), agus 20–65% A (23–40 min). Chaidh tonn-fhaid an lorg a sganadh aig 210–400 nm agus a chlàradh aig 254 nm. B’ e 10.0 meud an stealladh.μL. Chaidh fuasglaidhean àbhaisteach airson trì cròmonan a dhearbhadh ullachadh aig dùmhlachd deireannach de 7.781 mg/mL (prìomh-O-glucosylcimifugin), 31.125 mg/mL (4′-O-β-D-glucosyl-5-O-methylvisaminol), agus 31.125 mg/mL (diog-O-glucosylhamaudol) ann am methanol agus air a chumail aig 4°C.
2.3. Measadh air Gnìomhachd an-aghaidh Ath-bhriseadhAnn an Vitro
2.3.1. Cultar Cealla agus Làimhseachadh Sampall
Fhuaireadh ceallan RAW 264.7 bhon American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) agus chaidh an cur ann am meadhan DMEM anns an robh 1% antibiotics agus 5.5% FBS. Chaidh na ceallan a ghoir ann an àile taisichte de 5% CO2 aig 37°C. Gus na ceallan a bhrosnachadh, chaidh am meadhan a chur an àite le meadhan DMEM ùr, agus lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) aig 1μchaidh g/mL a chur ris an làthair no às aonais SDE (200 no 400μg/mL) airson 24 uair a bharrachd.
2.3.2. Co-dhùnadh air Nitric Oxide (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumor Necrosis Factor-α(TNF-α), agus Riochdachadh Interleukin-6 (IL-6)
Chaidh ceallan a làimhseachadh le SDE agus a bhrosnachadh le LPS airson 24 uair a thìde. Chaidh cinneasachadh NO a sgrùdadh le bhith a’ tomhas nitrite a’ cleachdadh an ath-bhualadair Griess a rèir sgrùdadh roimhe [12]. Rùnadh nan cytokines inflammatory PGE2, TNF-α, agus chaidh IL-6 a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh pasgan ELISA (siostaman R&D) a rèir stiùiridhean an neach-dèanamh. Chaidh buaidh SDE air cinneasachadh NO agus cytokine a dhearbhadh aig 540 nm no 450 nm le bhith a’ cleachdadh Wallac EnVision.™leughadair meanbh-phlàtaichean (PerkinElmer).
2.4. Measadh air Gnìomhachd an-aghaidh OsteoarthritisAnn am Beò
2.4.1. Beathaichean
Chaidh radain fhireann Sprague-Dawley (7 seachdainean a dh'aois) a cheannach bho Samtako Inc. (Osan, Coirea) agus chaidh an cur fo chumhachan fo smachd le cearcall solais/dorchadas 12-uair aig°C agus% taiseachd. Chaidh daithead obair-lann agus uisge a thoirt do na radainad libitumChaidh a h-uile modh-obrach deuchainneach a dhèanamh a rèir stiùiridhean nan Institiudan Nàiseanta Slàinte (NIH) agus chaidh aontachadh le Comataidh Cùram is Cleachdadh Bheathaichean Oilthigh Daejeon (Daejeon, Poblachd Chorea).
2.4.2. A’ toirt a-steach OA le MIA ann an radain
Chaidh na beathaichean a chur air thuaiream agus an cur ann am buidhnean làimhseachaidh mus do thòisich an sgrùdadh (gach buidheann). Fuasgladh MIA (3 mg/50μL de 0.9% saline) air a stealladh gu dìreach a-steach don àite intra-articular den ghlùin dheis fo anesthesia air a bhrosnachadh le measgachadh de ketamine agus xylazine. Chaidh radain a roinn air thuaiream ann an ceithir buidhnean: (1) a’ bhuidheann saline gun stealladh MIA, (2) a’ bhuidheann MIA le stealladh MIA, (3) a’ bhuidheann air a làimhseachadh le SDE (200 mg / kg) le stealladh MIA, agus (4) a’ bhuidheann air a làimhseachadh le indomethacin- (IM-) (2 mg / kg) le stealladh MIA. Chaidh SDE agus IM a thoirt do radain gu beòil 1 seachdain ron stealladh MIA airson 4 seachdainean. Bha an dòs de SDE agus IM a chaidh a chleachdadh san sgrùdadh seo stèidhichte air an fheadhainn a chaidh a chleachdadh ann an sgrùdaidhean roimhe [10,13,14].
2.4.3. Tomhais air Sgaoileadh Giùlan Cuideam na Spòige Deiridh
Às dèidh inntrigeadh OA, chaidh an cothromachadh tùsail ann an comas giùlain cuideam nan spògan deiridh a bhriseadh. Chaidh deuchainn neo-chomasachd (Linton instrumentation, Norfolk, RA) a chleachdadh gus atharrachaidhean ann an fulangas giùlain cuideam a mheasadh. Chaidh radain a chur gu faiceallach anns an t-seòmar tomhais. Chaidh an fheachd giùlain cuideam a chuir a’ bhall deiridh an gnìomh a chuibheasachadh thairis air ùine 3 diogan. Chaidh co-mheas sgaoileadh cuideam obrachadh a-mach leis a’ cho-aontar a leanas: [cuideam air ball deiridh deas/(cuideam air ball deiridh deas + cuideam air ball deiridh clì)] × 100 [15].
2.4.4. Tomhaisean de Ìrean Cytokine Serum
Chaidh na sampallan fala a shnìomh aig 1,500g airson 10 mionaidean aig 4°C; an uairsin chaidh an serum a chruinneachadh agus a stòradh aig −70°C gus an deach a chleachdadh. Na h-ìrean de IL-1β, IL-6, TNF-α, agus chaidh PGE2 anns an t-serum a thomhas le bhith a’ cleachdadh innealan ELISA bho R&D Systems (Minneapolis, MN, USA) a rèir stiùiridhean an neach-dèanamh.
Chaidh RNA iomlan a thoirt a-mach à clò co-phàirteach na glùine a’ cleachdadh an TRI reagent® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), air a thar-sgrìobhadh air ais gu cDNA agus air a mheudachadh le PCR a’ cleachdadh pasgan TM One Step RT PCR le uaine SYBR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Chaidh PCR cainneachdail fìor-ùine a dhèanamh a’ cleachdadh siostam Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Tha na sreathan primer agus an t-sreath probe air an sealltainn ann an Clàr.1Chaidh cuibhreannan de cDNA sampall agus an aon mheud de cDNA GAPDH a mheudachadh leis a’ mheasgachadh maighstir TaqMan® Universal PCR anns a bheil polymerase DNA a rèir stiùiridhean an neach-dèanamh (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). B’ e na cumhaichean PCR 2 mhionaid aig 50°C, 10 mionaidean aig 94°C, 15 diogan aig 95°C, agus 1 mhionaid aig 60°C airson 40 cearcall. Chaidh dùmhlachd a’ ghine targaid a dhearbhadh a’ cleachdadh an dòigh Ct coimeasach (àireamh cearcall stairsneach aig puing-croise eadar plota iomadachaidh agus stairsneach), a rèir stiùiridhean an neach-dèanamh.
’S e osteoarthritis (OA) an eas-òrdugh cnàimh-shnàimheach as cumanta agus an galar co-phàirteach crìonaidh as cumanta ann an seann daoine [1]. 'S e suidheachadh a th' ann an OA a tha air adhbhrachadh gu ìre le dochann, call structar is gnìomh cartilage, agus mì-riaghladh shlighean pro-inflammatory agus anti-inflammatory [2,3Bidh e a’ toirt buaidh sa mhòr-chuid air cartilage articular agus cnàimh fo-chondral nan joints synovial agus ag adhbhrachadh fàilligeadh co-phàirteach, ag adhbhrachadh pian nuair a ghiùlaineas tu cuideam a’ gabhail a-steach coiseachd agus seasamh [4].
Chan eil leigheas ann airson OA, oir tha e glè dhoirbh an cartilage a thoirt air ais aon uair ‘s gu bheil e air a sgrios [5Is e amasan an làimhseachaidh pian a lughdachadh, gluasad co-phàirteach a chumail suas no a leasachadh, neart nan co-phàirtean a mheudachadh, agus buaidhean ciorramach a’ ghalair a lughdachadh. Tha leigheasan cungaidh-leigheis airson OA ag amas air pian a lughdachadh gus gnìomhachd co-phàirteach agus càileachd beatha an euslaintich a mheudachadh. Ged is e sgrios cartilage am prìomh thachartas ann an OA, is e crìonadh collagen am prìomh thachartas a tha a’ dearbhadh adhartas neo-atharrachail OA ann an co-cheangal ri sèid [6,7Thathar an dùil gum bi leigheasan le gnìomhachd an-aghaidh sèid agus dìon-chondro a’ lughdachadh pian agus a’ cumail suas ionracas a’ mhaitrics ann an euslaintich OA.
Mar sin, tha e coltach gum bi lùghdachadh sèid buannachdail ann an riaghladh OA. Tha sgrùdaidhean o chionn ghoirid a’ moladh dreuchdan dìona airson goireasan luibhean air adhartas OA, a thaobh lughdachadh sèid chondrocyte agus tuilleadh sgrios cartilage, tro an comas eadar-obrachadh le figheagan co-cheangailte ris na co-phàirtean, agus mar thoradh air sin bidh pian co-phàirteach air a lughdachadh [8].
FreumhSaposhnikovia divaricataTha Schischkin (Umbelliferae) air a bhith air a chleachdadh gu farsaing ann an leigheas traidiseanta airson ceann goirt, pian, sèid agus airtreitis a làimhseachadh ann an Coirea agus Sìona [9,10]. Na buaidhean cungaidh-leigheis eadar-mheasgte a th’ aigSaposhnikovia divaricataTha feartan an-aghaidh sèid, faochadh pian, lughdachadh fiabhrais, agus an-aghaidh airtritis (SD) cuideachd annta [9,11Sheall sgrùdadh o chionn ghoirid gu bheil buaidhean comasach aig earrann chromone SD airson airtritis an-aghaidh reumatoid ann am modail luchaige de airtritis air adhbhrachadh le collagen [10]; ge-tà, chan eil mòran sgrùdaidhean air an dèanamh gus taic a thoirt do ghnìomhachd an-aghaidh sèid agus an-aghaidh airtritisSaposhnikovia divaricataearrann (SDE).
Mar sin, rinn an sgrùdadh seo sgrùdadh air gnìomhachd an-aghaidh sèid agus an-aghaidh osteoarthritis earrann 70% ethanol de SD. An toiseach, chaidh buaidh an-aghaidh sèid SDE a mheasadh.ann an vitroann an ceallan RAW 264.7 air an adhbhrachadh le LPS. An ath rud, chaidh buaidh an-aghaidh osteoarthritis SDE a thomhas le bhith a’ measadh sgaoileadh giùlain cuideim, crìonadh cartilage articular, agus freagairtean sèididh ann am modail radain de OA air adhbhrachadh le monosodium iodoacetate (MIA-).